Con Que Microscopio Se Ven Las Bacterias?
Microscopio óptico y tamaño bacteriano
El microscopio óptico no solo necesita muchos aumentos, sino también objetivos de inmersión en aceite para mejorar los exámenes morfológicos a la hora de diferenciar entre cocos (esferas), bastones (bacilos) y espirales (espiroquetas).
Como la mayoría de patógenos son muy pequeños, el diámetro medio de las bacterias está entre 0,2 y 2,0 micrómetros.
Una muy buena diferenciación de tipos de células bacterianas y detalles celulares claramente visibles son requisitos básicos en microbiología.
- Las bacterias son organismos invisibles al ojo humano, pero bajo la lente de un microscopio se puede apreciar lo sorprendentemente organizadas que son.
- Lejos de ser simples estructuras amorfas, presentan formas bastante definidas que permiten que los científicos puedan identificarlas y clasificarlas con total precisión.
- Esta característica es la que se conoce como morfología bacteriana, y es una de las herramientas básicas en microbiología.
- La diversidad estructural de las bacterias no solo facilita su estudio, sino que también ayuda a entender cómo se organizan y se reproducen.
- Uno de los grupos más conocidos son los cocos, bacterias con forma esférica.
- Estas pueden aparecer como pequeñas bolitas aisladas o formando agrupaciones con patrones concretos.
Según cómo se agrupen, pueden diplococos, estafilococos, estreptococos o tétradas. Un ejemplo representativo es Staphylococcus aureus, una bacteria que se puede encontrar habitualmente en la piel humana.
Rango de aumento
Puedes ver bacterias con menos de 1000x. Puedes verlas a 400x.
Puedes empezar a distinguirlos a 400x. Incluso a 1000x no podrás distinguir muchos detalles.
- A 1000x, una bacteria se ve más o menos como un punto.
- Puedes distinguir la forma básica, como bacilo vs. coco, y puedes reducir el tipo de bacteria que es por el tipo de tinción que toma.
- La mayoría de los microscopios vienen con un objetivo de 100x que combinado con los oculares de 10x, te da 1000x.
- La magnificación de 1000x en la mayoría de los microscopios de gama baja se realiza colocando una gota de aceite en el cubreobjetos del portaobjetos de vidrio y poniéndolo en contacto con el objetivo de 100x.
- A menos que estés usando un sistema de cámara, puedes duplicar la magnificación simplemente usando una retícula de 20x en lugar de 10x.
Un aumento típico para microscopios educativos es de 40x a 400x, mientras que los microscopios avanzados pueden alcanzar 1000x o más.
El aumento se calcula multiplicando el aumento del ocular, la lente superior por donde miras, por el aumento del objetivo, la lente cercana a la muestra.
No se trata solo de conseguir el microscopio con mayor aumento, sino de encontrar el que se adapte mejor a lo que deseas observar.
Objetivos de inmersión en aceite
Esos objetivos generalmente requieren aceite de inmersión entre ellos y la diapositiva.
Un pequeño punto de aceite conecta el objetivo y la diapositiva, y el aceite tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, por lo que puedes obtener un mayor contraste.
- Objetivo de 100x de inmersión en aceite
- Bacteria Staphylococcus, tinción de Gram grampositiva, objetivo de 100x de inmersión en aceite.
- Exámenes morfológicos
- Los objetivos de inmersión en aceite mejoran los exámenes morfológicos a la hora de diferenciar entre cocos, bastones y espirales.
- Contraste
- Se puede mejorar el contraste con varias tinciones específicas o no específicas, como la tinción de Gram.
- Calidad óptica
- La calidad óptica del microscopio, la fidelidad de la cámara conectada para la documentación digital y el diseño ergonómico del instrumento pueden marcar la diferencia a la hora de cribar muestras de pacientes de forma eficiente.
Se puede lograr una especificidad aún mayor con la microscopía de fluorescencia, ya sea de forma no específica para la identificación de la tuberculosis o muy específica con inmunofluorescencia acoplada a anticuerpos y FISH, hibridación in situ de fluorescencia.
Preparación y tinción
Cuando se ha aislado el patógeno, se puede estudiar con un microscopio óptico.
El método primario usado para el aislamiento de enfermedades infecciosas en el laboratorio es el cultivo microbiológico.
- Las muestras de tejidos o fluidos se analizan para detectar la presencia de un patógeno específico.
- Lo cual se determina mediante un cultivo in vitro en un medio selectivo o diferencial.
- El medio puede ser un cultivo sólido, la mayoría de bacterias y hongos.
- El medio puede ser un cultivo líquido, determinados parásitos.
- El medio puede ser un cultivo celular, la mayoría de análisis de virus.
- La tinción de Gram también permite diferenciar entre bacterias grampositivas y gramnegativas, debido a las diferencias en la composición de la pared celular bacteriana.
Los microbiólogos se basan en imágenes muy claras para examinar quistes, protozoos y huevos de gusano en muestras de heces, Plasmodium en muestras de sangre o micobacterias y otros microorganismos patógenos.
Para el examen microscópico, se usan técnicas de campo claro, contraste de fases, campo oscuro, fluorescencia, inmunofluorescencia o microscopía FISH.
La microbiología es la rama de la medicina que se dedica a la prevención, el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades infecciosas provocadas por patógenos como bacterias, hongos, levaduras, parásitos o virus.
Tinciones para bacterias
Mycobacterium tuberculosis causa tuberculosis, es inmóvil y tiene forma de bastoncillo, y se caracteriza e identifica por una propiedad conocida como “acidorresistente”.
El método preferido de identificación es una tinción de AFB, denominada también tinción de bacterias acidorresistentes.
- Ponga las preparaciones en agua.
- Carbol fucsina, temperatura ambiente, entre 30 y 60 min.
- La aplicación de calor a 60 °C puede acortar los tiempos de incubación.
- Enjuague bien con agua corriente, 5 min.
- Alcohol ácido HCl al 1 %, alcohol al 70 %, 10 seg.
- Enjuague bien con agua corriente, 2 min.
- Azul de metileno al color deseado, entre 30 y 40 seg.
- Enjuagar brevemente con agua corriente, 15 seg.
- Se deshidrata rápidamente con alcoholes.
- Aclarar y montar.
El ácido micólico es el mecanismo responsable de la propiedad acidorresistente. Esta sustancia cerosa es producida por las paredes de las bacterias.
Las opciones más comunes de las tinciones de AFB son carbol fucsina de Kinyouin o carbol fucsina de Ziehl-Neelsen. Las soluciones, los procedimientos y los resultados son similares para ambas.
Características observables
En el microscopio se ven muy definidas.
La morfología bacteriana permite clasificar microorganismos y entender mejor cómo se agrupan y comportan.
- Los cocos son bacterias con forma esférica.
- Los bastones son bacilos.
- Las espirales son espiroquetas.
- Helicobacter pylori tiene forma de espiral y está asociada a inflamación gástrica, úlceras pépticas y carcinoma gástrico.
- Mycobacterium leprae produce lepra y tiene propiedades acidorresistentes similares a M. tuberculosis.
- Los bacilos BAAR pueden enmascararse si realiza una tinción excesiva en esta contratinción.
Giemsa es una tinción policromática compuesta de tintes con diferentes tonalidades.
Las tinciones preferidas para la demostración de Helicobacter pylori son la tinción de Warthin Starry con plata o una de las muchas modificaciones, tinción Giemsa y procedimientos de inmunohistoquímica, los más sensibles.
La tinción de Warthin Starry puede ser difícil de dominar. Asegúrese de seguir todas las instrucciones del fabricante para la mezcla de soluciones. Use instrumental de vidrio limpio y agua desionizada cuando se solicite.
