Como Se Observa La Muestra Bajo El Microscopio?

El uso del microscopio puede parecer complicado al principio, pero con un poco de práctica y conocimiento básico, puedes dominar su uso. Para observar correctamente una muestra bajo el microscopio, es necesario seguir una serie de pasos que abarcan desde la preparación del equipo hasta la exploración detallada del espécimen.

Preparación del microscopio

Antes de colocar cualquier muestra, es fundamental preparar correctamente el instrumento:

• Coloca el microscopio en una superficie plana y estable.
• Asegúrate de tener un microscopio limpio y bien iluminado.
• Verifica que esté conectado a una fuente de alimentación si es un microscopio con iluminación incorporada.
• Ajusta el ocular y los objetivos según tus preferencias de comodidad visual.
• Si el microscopio se encuentra en la mesa de trabajo, lo primero será quitar la funda protectora. Si debe portarse desde el lugar de reserva hasta la mesa de trabajo, el microscopio debe cogerse, con firmeza, desde su brazo o columna.
• Enciende o enchufa el microscopio a la corriente eléctrica y regula al máximo la intensidad de luz.
• Con la ayuda del tornillo macrométrico, baja la platina hasta el tope fin de giro.
• El objetivo de menor aumento (4x), caracterizado por su pequeño tamaño y una línea roja, debe localizarse perpendicular a la platina. Por lo tanto, gira el revólver hasta localizarlo en esta posición.

Colocación de la muestra

La correcta preparación y colocación de la muestra en el portaobjetos es un paso esencial para obtener una observación nítida:

1. Coloca la muestra que deseas observar en un portaobjetos limpio y seco.
2. Si es necesario, coloca una gota de líquido de montaje o agua para mantenerla en su lugar y ayudar a la observación.
3. Coloca el portaobjetos en la platina del microscopio y asegúralo con las pinzas o clips apropiados.
4. Asegura que la muestra esté bien centrada y nivelada, y localiza la muestra sobre el orificio de entrada de luz.

Ajuste de la iluminación

La iluminación adecuada determina en gran medida la calidad de la imagen observada. Enciende la fuente de iluminación del microscopio y ajusta la intensidad de la luz según sea necesario. Puedes hacerlo usando el regulador de intensidad o el diafragma del condensador si tu microscopio lo tiene, comenzando con una configuración baja e incrementando gradualmente si es necesario.

Como anotación adicional, se recomienda el uso del diafragma para modificar la entrada de luz, con el consiguiente aumento del contraste de la muestra. En otros casos, con la ayuda de un disco de cartulina oscura, se puede tapar parcialmente la fuente de iluminación, permitiendo la salida de un haz de luz periférico, aumentando el contraste de la muestra (microscopía de campo oscuro).

Enfoque de la muestra

El enfoque es el paso más importante del proceso de observación. Observando la preparación a través de la lente ocular, y girando el tornillo macrométrico lentamente, se debe percibir correctamente la preparación a bajo aumento.

1. Comienza utilizando el objetivo de menor aumento (generalmente 4x) y gira el revólver del microscopio para seleccionar ese objetivo.
2. Mirando a través del ocular, utiliza el tornillo macrométrico (grueso) para alejar el objetivo hasta que veas la muestra borrosa en el campo visual.
3. Utiliza el tornillo micrométrico (fino) para enfocar la muestra girándolo en ambas direcciones hasta que obtengas una imagen clara y bien enfocada.
4. Los sistemas ópticos actuales disponen de lentes parafocales; es decir, el cambio de lente tras el giro del revólver no implica modificación del enfoque de la preparación. De este modo, se puede pasar a 10x y 40x, modificando brevemente el enfoque con el giro del tornillo micrométrico.

Ajuste del aumento

Una vez que hayas enfocado con el objetivo de menor aumento, puedes girar el revólver para seleccionar un objetivo de mayor aumento, como 10x, 40x o 100x. Cada vez que cambies de objetivo, deberás volver a enfocar utilizando el tornillo micrométrico (fino).

Si se dispone de objetivo de inmersión 100x, previo a observar a través del mismo, se añadirá una gota de aceite de inmersión sobre el portaobjetos para, finalmente, modificar el enfoque con el micrométrico. Se recomienda en este caso pasar directamente de la lente objetivo 4x a la lente 100x, evitándose que el resto de lentes pudieran tocar el aceite de inmersión.

Modos de observación según el tipo de muestra

Un microscopio biológico utiliza la luz transmitida para la observación. Sin embargo, se han desarrollado diferentes modos de observación para utilizar características de luz específicas para muestras concretas, como especímenes transparentes y muestras que no pasan la luz. Cada modo de observación se ha desarrollado para utilizar adecuadamente las características de la luz, como la dispersión, la difracción, la polarización, la interferencia y la fluorescencia.

Microscopía de campo claro

Modo de observación general para microscopios biológicos, que presenta un campo de visión luminoso con iluminación transmitida. Objetos habituales: organismos vivos, células.

Microscopía de campo oscuro

Utiliza la luz dispersa, no la directa, para que las muestras luzcan en un campo visual oscuro. Objetos habituales: microorganismos, células.

Microscopía de contraste de fase

Utiliza la fase (variaciones de luz) para convertir una muestra en contraste de luminosidad para su observación. Objetos habituales: muestras transparentes sin color, células vivas.

Microscopía de contraste de interferencia diferencial

Utiliza la diferencia de distancias que recorre la luz transmitida tras atravesar una muestra para generar un contraste de color o luminosidad para la observación en 3D. Objetos habituales: muestras transparentes sin color, células vivas.

Microscopía de fluorescencia

Tiñe una muestra con un compuesto fluorescente o una proteína fluorescente como la GFP para observar la parte que expresa fluorescencia. Objetos habituales: células y tejidos teñidos o marcados con un colorante fluorescente, organismos vivos que presentan fluorescencia intrínseca.

Microscopía de luz polarizada

Ilumina una muestra con luz polarizada para convertirla en luminosidad o contraste de color para su observación. Objetos habituales: cristales como rocas y minerales, polímeros.

Microscopía de luz reflejada

Utiliza la luz reflejada para observar muestras que no pasan la luz. Objetos habituales: metales.

El contraste en la observación

El contraste es necesario cuando la resolución y la observación distintiva de los objetos presentes en la preparación se hacen muy difíciles. Un cuerpo tendrá mucho contraste cuando su índice de refracción sea muy diferente al índice de refracción del medio en el que está sumergido. Por ejemplo, las células tienen índices de refracción parecidos al agua, ya que un 75% de su composición química está definida por esta molécula. Este hecho permite que los rayos de luz que atraviesen la muestra no retarden la fase de luz, frente a aquellos que lo hacen en el medio acuoso. Por tanto, cuando se unan al final del proceso de observación, no darán un buen contrastado de la muestra ya que ambas fases son iguales.

Por el contrario, cuando las estructuras biológicas tienen un índice de refracción diferente al agua su contraste será mayor. Las partes coloreadas de algunos microorganismos, tales como las presentes en las algas microscópicas, tendrán mejor contrastado frente a aquellos que carecen de las mismas. El contrastado de estructuras biológicas fue un desafío constante durante el siglo XIX tras el avance de la óptica del microscopio, y la preocupación acabó con la utilización del color, es decir, el uso de las tinciones.

Exploración y observación de la muestra

Una vez ajustados el enfoque y el aumento, es posible explorar y observar la muestra en detalle:

• Utiliza los mandos de enfoque (tornillos micrométrico y macrométrico) según sea necesario para obtener una imagen clara a diferentes niveles de detalle.
• Si es necesario, ajusta la intensidad de la iluminación, la posición de la platina o el diafragma para mejorar la calidad de la imagen.
• Utiliza los controles de la platina para mover la muestra y explorar diferentes áreas.
• Ajusta el enfoque nuevamente cuando cambie la posición de la muestra.

Cuidado y apagado del microscopio

Para sustraer el portaobjetos tras el análisis de la preparación, se cambiará con ayuda del revólver al objetivo de 4x y bajará la platina con ayuda del tornillo macrométrico. La lente que suele sufrir mucho el uso del aceite de inmersión debe limpiarse al finalizar la experiencia, evitándose que los restos de aceite pudieran dañar o quedar incrustados en el objetivo. Se recomienda la limpieza mediante el frote de la lente con una gasa suave que porta unas gotas de xileno.

Después de usar el microscopio, asegúrese de limpiar las lentes oculares y objetivos con un paño o papel de lente limpio y cualquier residuo o mancha en el microscopio antes de guardarlo. Apaga la fuente de iluminación y desconecta el microscopio de la fuente de alimentación si es necesario. Cubre el microscopio y guárdalo en un lugar seguro. Recuerde seguir las instrucciones específicas del modelo de microscopio que está utilizando, ya que pueden variar ligeramente de un modelo a otro. La práctica regular te ayudará a familiarizarte y mejorar tus habilidades en el uso del microscopio.